密理博ECL發(fā)光液使用方法和注意事項(xiàng)

密理博ECL發(fā)光液在HRP的催化下發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而發(fā)光，可用于檢測固定在膜上的蛋白質(zhì)等生物大分子。使用照相技術(shù)（X-光膠片曝光）或者其他成像方法（如熒光或化學(xué)發(fā)光成像儀）進(jìn)行檢測。

密理博ECL發(fā)光液是在普通的化學(xué)發(fā)光液基礎(chǔ)之讓改進(jìn)而來，相對于普通發(fā)光液來說，靈敏度更高，檢測下限更低，可達(dá)到pg級別的抗原，并且一抗和二抗的稀釋度更高。

密理博ECL發(fā)光液使用方法：

1.使用合適的方法進(jìn)行Western，直至用PBST洗滌二抗。

2.新鮮配制ECL工作液：試劑I和試劑II按1:1混合后，用雙蒸水10倍稀釋，混合后即為ECL工作液。須立即使用。

3.印跡膜蛋白面朝上，用ECL工作液均勻滴加至印跡膜室溫孵育1-2分鐘。ECL工作液使用量大約為0.125ml/cm2膜或根據(jù)個人實(shí)驗(yàn)習(xí)慣使用。

4.用平頭鑷夾住印跡膜，垂直置于吸水紙以吸去多余工作液。

5.快速將印跡膜置于二層保鮮膜之間，盡量趕盡氣泡。

6.將印跡膜蛋白面朝上，放于X光膠片暗盒內(nèi)。

7.在暗室內(nèi)放入X光片，曝光，顯影。

 

密理博ECL發(fā)光液注意事項(xiàng)：

1.ECL工作液配制過程中吸取試劑I和試劑II時務(wù)必跟換Tip頭，工作液新鮮配制后立即使用，放置過久會影響靈敏度。

2.根據(jù)蛋白豐度不同曝光時間可能是數(shù)秒至數(shù)小時。

3.曝光時間過長會使背景加深，曝光不足會導(dǎo)致條帶模糊。

4.如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發(fā)光和曝光。

5.應(yīng)使用高質(zhì)量保鮮膜。